地红方调控Keap1/Nrf2信号通路干预糖尿病血管内皮细胞氧化应激损伤的研究附视频
何卫东, 杨柳清, 林姿, 徐林诗, 刘建帅
目的 观察地红方对糖尿病血管内皮细胞Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路相关因子的影响。方法 传代后的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）以标准培养液培养24 h，更换培养液并随机分为5个组，每组10个样本。(1)正常组：葡萄糖浓度为5.6 mmol/L的MEM培养液加10%的无药血清培养；(2)模型组：葡萄糖浓度为22.2 mmol/L的MEM培养液加10%的无药血清培养；(3)低剂量含药血清组（简称低剂量组）：在模型组基础上培养6 h后，葡萄糖浓度为22.2 mmol/L的MEM培养液加5%含药血清及5%无药血清继续培养；(4)中剂量含药血清组（简称中剂量组）：在模型组基础上培养6 h后，葡萄糖浓度为22.2mmol/L的MEM培养液加7.5%含药血清及2.5%无药血清继续培养；(5)高剂量含药血清组（简称高剂量组）：在模型组基础上培养6 h后，葡萄糖浓度为22.2 mmol/L的MEM培养液加10%含药血清继续培养。以上各组分组培养72 h后，Western blot检测各组血管内皮细胞质内Keap1的蛋白表达，实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组血管内皮细胞Nrf2、谷胱甘肽S-转移酶（GST）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）、NAD(P)H：醌氧化还原酶-1(NQO1)和血红素加氧酶-1(HO-1)的mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组Keap1蛋白表达明显下降（P<0.05）；中剂量组、高剂量组Nrf2、GST、SOD、CAT、GPx、GCL、NQO1、HO-1的mRNA表达明显升高（P<0.05或P<0.01）。与模型组相比，低、中、高剂量组Keap1蛋白表达和Nrf2、GST、SOD、CAT、GPx、GCL、NQO1、HO-1的mRNA表达均明显升高（P<0.05或P<0.01）。与中剂量组比较，低剂量组GST、SOD、CAT、GPx、NQO1、HO-1的mRNA表达明显下降（P<0.05）。结论 地红方可能通过调控Keap1/Nrf2信号通路治疗糖尿病血管内皮细胞氧化应激损伤。