方汉军, 李锋华, 许成, 廉秋芳
目的探讨转化生长因子β1（TGF-β1）基因沉默脂肪干细胞（ADSCs）移植对盐敏感性高血压大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响。方法本实验于2015年6月—2016年7月在陕西省医学实验动物中心实验室完成。体外培养ADSCs,构建TGF-β1为靶向基因的mRNA和siRNA表达质粒,病毒转染至ADSCs,取第三代ADSCs进行慢病毒转染,转染时分为空白组、对照组、TGF-β1-siRNA转染组。采用Western blot法检测基因转染后第3天和第14天不同基因转染组ADSCs TGF-β1蛋白表达情况。选取80只SPF级雄性Dahl盐敏感大鼠构建盐敏感性高血压大鼠模型,采用随机数字表法分为正盐组、高盐组、ADSCs组及TGF-β1基因沉默组,每组20只。正盐组给予0.3%氯化钠饮食;高盐组给予8%氯化钠饮食;ADSCs组予8%氯化钠饮食6周后尾静脉移植ADSCs,持续3 d;TGF-β1基因沉默组大鼠给予8%氯化钠饮食6周后尾静脉移植TGF-β1基因沉默ADSCs,持续3 d。细胞移植2周后,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测4组大鼠心肌组织TGF-β1mRNA表达情况,采用Western blot法检测4组大鼠心肌组织TGF-β1蛋白表达情况,采用超声心动图检测4组大鼠左心室射血分数（LVEF）和缩短分数（FS）,并计算左心室质量指数（LVMI）,VG染色测算胶原容积积分,HE染色观察心肌细胞形态,荧光显微镜下观察心肌组织中CM-Dil标记的ADSCs分布情况,采用TUNEL法检测4组大鼠心肌细胞凋亡情况。结果 （1）荧光显微镜下显示,CM-Dil标记的ADSCs呈橘红色,标记率为97%。（2）基因转染后第3天和第14天空白组和对照组ADSCs TGF-β1蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义（P>0.05）,而TGF-β1-siRNA转染组ADSCs TGF-β1蛋白相对表达量低于空白组和对照组（P<0.05）。（3）细胞移植2周后,TGF-β1基因沉默组大鼠心肌组织TGF-β1mRNA、蛋白相对表达量低于正盐组、高盐组及ADSCs组,ADSCs组大鼠心肌组织TGF-β1mRNA、蛋白相对表达量低于正盐组、高盐组,高盐组大鼠心肌组织TGF-β1mRNA、蛋白相对表达量高于正盐组（P<0.05）。（4）细胞移植2周后,高盐组和ADSCs组大鼠LVEF和FS低于正盐组和TGF-β1基因沉默组,LVMI高于正盐组和TGF-β1基因沉默组（P<0.05）;ADSCs组和TGF-β1基因沉默组大鼠LVEF和FS高于高盐组,LVMI低于高盐组（P<0.05）;正盐组与TGF-β1基因沉默组大鼠LVEF、FS及LVMI比较,差异无统计学意义（P>0.05）。（5）细胞移植2周后,高盐组、ADSCs组和TGF-β1基因沉默组大鼠胶原容积积分高于正盐组,ADSCs组和TGF-β1基因沉默组大鼠胶原容积积分低于高盐组,TGF-β1基因沉默组大鼠胶原容积积分低于ADSCs组（P<0.05）。（6）HE染色结果显示,细胞移植2周后高盐组大鼠心肌出现明显纤维化且巨噬细胞浸润明显增多,ADSCs组大鼠心肌纤维化较轻,TGF-β1沉默组大鼠心脏纤维化最轻、巨噬细胞浸润最少。（7）荧光显微镜下显示,细胞移植2周后正盐组和高盐组大鼠心肌组织中未发现CM-Dil标记的ADSCs,TGF-β1基因沉默组大鼠心肌组织中CM-Dil标记的ADSCs多于ADSCs组（P<0.05）。（8）细胞移植2周后,正盐组大鼠心肌细胞凋亡率为0,ADSCs组和TGF-β1基因沉默组大鼠心肌细胞凋亡率低于高盐组,TGF-β1基因沉默组大鼠心肌细胞凋亡率低于ADSCs组（P<0.05）。结论TGF-β1基因沉默ADSCs移植能有效减轻盐敏感性高血压大鼠心肌纤维化,减少心肌细胞凋亡。
高血压大鼠近交Dahl脂肪干细胞转化生长因子β1基因沉默心肌纤维化细胞凋亡
