蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素诱饵蛋白质粒构建
刘绍伟, 王洋, 田喜凤
(1)目的构建α-4贾第素诱饵蛋白质粒,为贾第素功能的研究奠定基础。(2)方法从α-4贾第素克隆载体pGM-T-α-4中双酶切获得α-4贾第素编码序列,与酵母表达质粒pGBKT7在DNA连接酶的作用下进行重组,重组载体通过热休克法转化大肠杆菌感受态细胞,大肠杆菌经过培养、筛选,碱裂解法提取质粒酶切鉴定获得pGBKT7-α-4诱饵载体。并对诱饵载体进行自激活验证,利用Western blot鉴定诱饵蛋白的表达情况。(3)结果经酶切和测序鉴定,获得了pGBKT7-α-4诱饵载体。转化子Y187酵母细胞在SD/-Trp平板上能够生长;而在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade平板上不能生长。说明pGBKT7-α-4质粒无自我激活作用。Western blot鉴定结果显示,pGBKT7-α-4转化酵母菌在52KD水平位置可检测到α-4融合C-Myc蛋白的表达。(4)结论构建α-4贾第素诱饵蛋白质粒。诱饵蛋白质粒无自我激活作用,在酵母菌株中表达良好,为贾第素功能的研究奠定了基础。
