桦木酸通过调节TGF-β/Smad信号通路抑制结肠癌细胞转移的研究
林晓英, 沈阿灵, 吴美珠, 程瑛, 陈晓萍, 刘慧馨, 刘丽雅, 沈志清, 吴湘燕, 徐南辉, 褚剑锋, 陈友琴, 彭军
目的:探讨桦木酸(BA)对人结肠癌细胞株HCT116生长和转移的影响及其可能的作用机制。方法:将HCT116培养于含10%胎牛血清和含1%青霉素/链霉素混合液的McCoy's 5A培养基中,于37℃、5%CO2培养箱中常规培养。将HCT116细胞以0.2×10～5个/mL的密度接种于96孔板培养过夜后,分别用不同浓度的BA(0、10、20和40μmol/L)干预细胞24、48、72 h,然后加入CCK8检测其在450 nm波长处的吸光值(A值)。将HCT116细胞以0.4×10～5个/mL的密度接种于12孔板培养过夜后,分别用不同浓度的BA(0、10、20、40μmol/L)干预细胞48 h,消化离心收集细胞并用台盼蓝染色,采用Countstar BioMed自动细胞计数仪计算细胞总数。将HCT116细胞以0.4×10～5个/mL的密度接种于12孔板培养过夜后,分别用不同浓度的BA(0、10、20、40μmol/L)干预细胞48 h,然后消化离心收集细胞并分别用1.0×10～5个/mL的细胞悬液进行细胞迁移和侵袭的Transwell实验,检测不同浓度BA干预48 h后对HCT116迁移和侵袭能力的影响。采用Western blot法检测BA干预48 h后对HCT116细胞转移相关蛋白TGF-β和Smad2/3的影响。结果:①CCK8检测结果显示,与0μmol/L组比较,经不同浓度的BA干预24、48、72 h后,各组细胞的活力均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞计数结果显示,与0μmol/L组比较,经不同浓度的BA干预48 h后,各组的细胞数明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。②Transwell检测细胞迁移和侵袭结果显示,与0μmol/L组比较,经不同浓度的BA干预48 h后迁移或侵袭到小室外膜的细胞数目受到不同程度的明显抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。③Western blot检测结果显示,与0μmol/L组比较,经不同浓度的BA干预48 h后TGF-β和Smad2/3蛋白表达水平明显下降。结论:桦木酸具有抑制结肠癌细胞生长和转移的作用,其作用机制可能通过调控TGF-β/Smad信号通路来实现。