片仔癀通过抑制TLR4/MAPK信号通路减轻LPS诱导的BV2小胶质细胞神经炎症损伤研究
目的:研究片仔癀（PZH）对脂多糖（LPS）诱导的BV2小胶质细胞神经炎症损伤的保护作用及机制。方法:将BV2小胶质细胞培养于含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的RPMI-1640完全培养基中,并置于5%CO2,37℃培养箱中常规培养。将BV2小胶质细胞以5×10～4个/mL的密度接种于96孔板,LPS（100 ng/mL）诱导BV2小胶质细胞炎症反应,同时分别用不同浓度PZH（0.05、0.10、0.15 mg/mL）干预12 h,加入MTT并于4 h后检测其490 nm处吸光度。将BV2小胶质细胞以5×10～4个/mL的浓密度接种于24孔板,LPS（100 ng/mL）诱导BV2小胶质细胞炎症反应,分别用不同浓度PZH（0.05、0.10和0.15 mg/mL）干预12 h,收集上清并使用ELISA法测定细胞上清中IL-6的水平。将BV2小胶质细胞以1.6×10～5个/mL的密度接种于6孔板,LPS（100 ng/mL）诱导BV2小胶质细胞炎症反应,同时分别用不同浓度PZH（0.05、0.10、0.15 mg/mL）干预12 h,使用TRIzol试剂提取总RNA,逆转录制备c DNA,然后采用RT-q PCR法检测BV2小胶质细胞中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α转录水平。将BV2小胶质细胞以1.6×10～5个/mL的密度接种于6孔板,LPS（100 ng/mL）诱导BV2小胶质细胞炎症反应,同时分别用不同浓度PZH（0.05、0.10、0.15 mg/mL）干预12 h,加入RIPA蛋白裂解液提取蛋白质,然后采用Western blot法检测BV2小胶质细胞中TLR4、ERK1/2、pERK1/2、p38、p-p38、JNK、p-JNK、COX-2和i NOS蛋白表达水平。结果:（1） MTT实验结果显示,与正常对照组比较,不同浓度PZH和LPS各自单独干预或者两者共同干预对BV2小胶质细胞活力均无明显影响（P>0.05）。（2） ELISA结果显示,与正常对照组比较,模型组IL-6分泌水平明显上升（P<0.001）;与模型组比较,不同浓度PZH可显著降低IL-6分泌水平（P<0.05,P<0.05,P<0.01）。（3） RT-q PCR结果显示,与正常对照组比较,模型组IL-1β（P<0.001）、IL-6（P<0.001）和TNF-α（P<0.01）转录水平明显上升;与模型组比较,不同浓度PZH可明显降低IL-1β（P<0.05,P<0.01,P<0.001）、IL-6（P>0.05,P<0.01,P<0.001）和TNF-α（P<0.01,P<0.01,P<0.001）转录水平。（4） Western blot结果显示,不同浓度PZH能显著抑制LPS诱导的TLR4/MAPK信号通路的激活,减少TLR4（P>0.05,P<0.05,P<0.05）、p-ERK1/2（P>0.05,P<0.05,P<0.01）、p-p38 （P<0.05,P<0.01,P<0.01）、COX-2 （P<0.01,P<0.01,P<0.001）和i NOS （P<0.01,P<0.01,P<0.01）蛋白表达水平,但对p-JNK蛋白表达无明显影响（P>0.05）。结论:片仔癀可明显改善LPS诱导的神经炎症损伤,其作用可能与抑制TLR4/MAPK信号通路激活相关。
