摘要

目的:分别从组织学和分子生物学层面观察蜘蛛香环烯醚萜类成分对大鼠脊髓损伤后氧化应激反应的影响。方法:选取体质量(250±30) g的雄性SD大鼠60只,采用随机数字表法分为假手术组、模型组和蜘蛛香环烯醚萜类成分治疗组(简称治疗组),每组20只。采用医用动脉瘤夹建立大鼠脊髓损伤模型,假手术组大鼠只进行椎板切除而不进行脊髓损伤。造模成功2 h后,治疗组给予灌胃10 mg/kg蜘蛛香环烯醚萜类成分溶液,假手术组、模型组给予灌胃等体积羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液,1次/d。3 d后处死大鼠,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;生化试剂盒检测脊髓组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和过氧化氢酶(CAT)活力;Western blot法观察凋亡相关蛋白:胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)和Bcl-2的表达水平;苏木精-伊红(HE)染色观察脊髓组织病理变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL法)观察脊髓组织神经细胞凋亡情况。结果:ELISA检测结果显示,与模型组比较,治疗组血清中SOD含量显著增加(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.01);试剂盒检测结果显示,与模型组比较,治疗组显著增加了脊髓组织中GSH-PX(P<0.05)和CAT(P<0.01)抗氧化酶活力;Western blot结果显示,与模型组比较,治疗组促凋亡蛋白Caspase-3、Bax表达明显降低(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显增加(P<0.05),且Bax/Bcl-2的比例明显下降(P<0.01)。HE染色结果显示,假手术组中脊髓组织灰质及白质结构正常,神经元结构清晰,未见显著的脊髓受损;与假手术组比较,模型组大鼠的脊髓组织中观察到脊髓结构严重受损,脊髓中央部的灰质和位于周围部的白质结构模糊,大量神经元变性、坏死,细胞结构被破坏,胞核皱缩或溶解消失并伴有不同程度的中性粒细胞浸润及大量小胶质细胞增生;与模型组比较,治疗组脊髓结构明显改善,脊髓组织病变相对较轻,小区域的神经元坏死,少量的嗜酸性细胞增多,小胶质细胞浸润,且组织病理学评分低于模型组(P<0.05)。同时TUNEL法检测结果显示,假手术未看到明显的棕黄色凋亡神经细胞,而模型组中观察到明显的棕黄色的凋亡神经细胞,与模型组比较,治疗组凋亡神经细胞数明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:蜘蛛香环烯醚萜类成分对脊髓损伤具有神经保护作用,其机制可能与减轻脊髓损伤后氧化应激反应有关。

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