摘要

目的 基于PERK通路探讨荣筋拈痛方（RJNTD）对毒胡萝卜素（TG）诱导的软骨细胞内质网应激反应的抑制作用。方法 将30只4周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠处死后，体外分离双膝软骨细胞置于低糖DMEM培养基培养，经Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色法鉴定后将软骨细胞分成空白组、对照组、模型组和中药组。空白组常规培养4 h，对照组常规培养4 h后更换300μg/mL RJNTD培养液培养12 h，模型组用25μmol/L TG培养液培养4 h后改为常规培养，中药组用25μmol/L TG培养液培养4 h后更换300μg/mL RJNTD培养液培养12 h。干预后采用Real-time PCR检测各组软骨细胞中miRNA-377-3p相对表达水平；Western blot检测各组软骨细胞中内质网降解增强子（EDEM1）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、转录激活子4(ATF4)、免疫球蛋白重链结合蛋白（BIP）与DNA损伤诱导基因153(GADD153)蛋白表达水平。结果 对照组各指标与空白组比较均无统计学意义（P均>0.05）；与空白组比较，模型组及中药组miRNA-377-3p相对表达水平显著降低（P<0.05），且中药组较模型组降低更不明显（P<0.05）；与空白组比较，模型组及中药组EDEM1、PERK、ATF4、BIP、GADD153蛋白表达水平均升高（P均<0.05），且中药组上述各指标较模型组升高更不明显（P均<0.05）。结论 RJNTD可通过PERK通路抑制内质网应激反应，进而发挥延缓TG诱导的软骨细胞退变作用，其潜在作用机制可能与调节miRNA-377-3p相关。

关键词