摘要

目的 从LncRNA H19/miR-675信号通路调控软骨基质合成的角度探讨荣筋拈痛方治疗膝骨关节炎（KOA）的作用机制。方法 取40只8周龄SPF级雄性SD大鼠随机分生理盐水组和荣筋拈痛方组各20只，分别对应灌胃生理盐水和荣筋拈痛方制备空白血清和含药血清。提取4周龄SPF级雄性SD大鼠膝关节进行软骨细胞培养、传代，待软骨细胞生长状态良好时采用10 ng/mL白细胞介素-1β(IL-1β)干预24 h复制退变软骨细胞模型，再通过慢病毒转染构建长链非编码RNA H19 (LncRNA H19)沉默病毒、微小RNA-675(miR-675)沉默病毒、miR-675过表达病毒模型，采用qPCR检测LncRNA H19、miR-675 mRNA相对表达水平情况进行鉴定。鉴定成功后再分别进行LncRNA H19沉默、miR-675沉默以及miR-675过表达3个实验研究。LncRNA H19沉默实验中将LncRNA H19沉默病毒转染退变软骨细胞分为NC-K-1组、NC-R-1组、H19 Down-K组和H19 DownR组；miR-675沉默实验中将miR-675沉默病毒转染退变软骨细胞NC-K-2组、NC-R-2组、miR-675 Down-K组和miR-675 Down-R组；miR-675过表达实验中将miR-675过表达病毒转染退变细胞分为NC-K-3组、NCR-3组、miR-675 Up-K组和miR-675 Up-R组。其中NC-K-1组、H19 Down-K组、NC-K-2组、miR-675Down-K组、NC-K-3组和miR-675 Up-K组采用含10%空白血清的DMEM培养基干预24 h;NC-R-1组、H19Down-R组、NC-R-2组、miR-675Down-R组、NC-R-3组和miR-675Up-R组采用含10%含药血清的DMEM培养基干预24 h。干预后LncRNA H19沉默实验中采用qPCR法检测各组miR-675、Aggrecan和Collagen mRNA相对表达水平；Western blot检测各组Aggrecan、Collagen蛋白表达量。miR-675沉默和过表达实验中分别采用qPCR法和Western blot检测Aggrecan和CollagenⅡmRNA相对表达水平和蛋白表达量。结果 (1) LncRNA H19沉默实验中，与NC-K-1组比较，NC-R-1组中miR-675 mRNA相对表达水平升高（P<0.05）,Aggrecan和CollagenⅡmRNA相对表达水平、蛋白表达量均升高（P<0.05）；与H19 Down-K组比较，H19 Down-R组miR-675 mRNA相对表达水平升高（P<0.05）,Aggrecan和CollagenⅡmRNA相对表达水平、蛋白表达量均升高（P<0.05）。(2) miR-675沉默实验中，与NC-K-1组比较，NC-R-2组中Aggrecan和CollagenⅡmRNA相对表达水平、蛋白表达量均升高（P<0.05）；与miR-675 Down-K组比较，miR-675 Down-R组Aggrecan和CollagenⅡmRNA相对表达水平、蛋白表达量均升高（P<0.05）。(3) miR-675过表达实验中，与NC-K-3组比较，NC-R-3组中Aggrecan、CollagenⅡ蛋白表达量均升高（P<0.05）；与miR-675 Up-K组比较，miR-675 Up-R组Aggrecan、CollagenⅡmRNA相对表达水平、蛋白表达量均升高（P<0.05）。结论 荣筋拈痛方可以通过LncRNA H19/miR-675通路促进Aggrecan和CollagenⅡmRNA mRNA mRNA相对表达水平和蛋白表达量，达到促进软骨基质合成、治疗KOA的作用。

关键词