摘要

(1)目的探讨构建人生长激素抑制素(Somatostatin,SST)基因过表达慢病毒载体的技术方法,为后续构建SST过表达子宫内膜癌细胞系提供基础。(2)方法通过设计SST基因引物,使用聚合酶链反应(PCR)的方法,扩增SST基因片段;使用EcoR I和BamHI两种限制性内切酶进行双酶切pLVX-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro慢病毒载体和目的基因SST片段,将两者酶切后的片段使用T4DNA连接酶进行连接,从而使将SST基因插入pLVX-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro慢病毒载体上,构建pLVX-SST-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro重组载体;运用双酶切后PCR方法鉴定阳性克隆的pLVXSST-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro载体;将重组载体转染293T细胞(人胚肾细胞),进行慢病毒包装并且观察其感染效率及测定病毒滴度。(3)结果通过PCR成功扩增SST基因并连接到pLVX-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro慢病毒载体上,通过DNA测序鉴定,并与GenBank上的SST基因标准序列进行对比,证明pLVX-SST-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro过表达慢病毒载体构建成功,将其转染293T细胞后可观察到绿色荧光的表达。成功包装SST过表达慢病毒载体然后测其滴度为1.0×108 TU/mL。(4)结论成功构建pLVX-SST-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro慢病毒载体,为SST基因的后续研究提供了实验基础。

关键词