摘要

(1)目的建立家兔腰椎髓核间充质干细胞(NPMSCs)体外培养模型并对其进行鉴定,为进一步研究椎间盘退变提供理论依据。(2)方法首先用酶消化法得到家兔原代髓核细胞,再将其加入间充质干细胞完全培养基中分离出NPMSCs并进行传代培养,观察NPMSCs的细胞学及生物学特性。最后进行细胞鉴定:运用流式细胞术检测家兔NPMSCs的细胞表面免疫表型CD105、CD90、CD34、CD45的表达情况;运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测间充质干细胞基因SOX2、Nanog的表达。(3)结果家兔髓核组织来源细胞在原代培养4～6天后即可见部分细胞贴壁生长,形态为短梭形或多角形。传代后细胞增殖速度明显加快,到第三代可见细胞大多为长梭形,待细胞达到90%融合时,可见细胞呈漩涡状生长。通过流式细胞术检测所培养细胞的表面免疫分子标志:CD105、CD90阳性表达,CD34、CD45阴性表达;运用RT-PCR检测所培养细胞可表达干细胞基因SOX2、Nanog。(4)结论成功在体外培养出家兔NPMSCs,为研究椎间盘退变的发生发展机制打下基础。

关键词