摘要

目的:探讨酸敏感离子通道1a(ASIC1a)在酸诱导的大鼠膝关节滑膜成纤维细胞(SFs)自噬中的作用和机制。方法:分离大鼠膝关节SFs,在不同胞外酸化条件处理后检测软骨自噬蛋白(LC3-Ⅱ)的表达。观察ASIC1a阻断剂对自噬小体数量、自噬基因(Beclin-1)mRNA的表达,自噬相关蛋白(RRK1/2、p38MAPK)磷酸化的影响;观察RRK1/2、p38MAPK磷酸化抑制剂对Beclin-1 mRNA、LC3-Ⅱ蛋白表达的影响。结果:HE染色结果证实符合SFs的特征;pH 7.4组LC3-Ⅱ蛋白表达<pH 7.0组<pH 6.5组<pH 6.0组/pH 5.5组,pH 6.0组与p H 5.5组组间比较差异无统计学意义(P>0.05),其余每两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);pH 7.4组细胞器完整且形态规则,pH 6.0组可见线粒体肿胀,且双层膜包裹的细胞自噬小体较多,pH 6.0+Amiloride组细胞质自噬小体数量稍少,细胞器形态有所恢复,pH6.0+PcTX1组细胞质自噬小体数量更高,细胞器接近正常;pH 7.4组Beclin-1 mRNA表达<pH 6.0+PcTX1组<pH 6.0+Amiloride组<pH 6.0组,每两组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);pH 7.4组ERK1/2、p38MAPK磷酸化水平<pH 6.0+PcTX1组<pH 6.0+Amiloride组<pH 6.0组,每两组间对比差异均有统计学意义(P<0.05);pH 7.4组Beclin-1 mRNA和LC3-Ⅱ蛋白表达<pH 6.0+PD98059组<pH 6.0+PcTX1组<pH6.0+SB203580组/pH 6.0组,pH 6.0+SB203580组的Beclin-1 mRNA和LC3-Ⅱ蛋白与pH 6.0组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),其余每两组间对比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:胞外酸化条件可诱导大鼠膝关节SFs自噬,阻断ASIC1a能明显弱化此作用,且特异性阻断剂的效果更佳,其机制可能与调控Beclin-1基因表达,抑制ERK1/2磷酸化有关。

关键词