摘要

目的：探究STAT3 miR-146-b反馈回路抑制IL-6的NF-κB信号轴调控结直肠癌细胞的干性机制。方法：用Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)培养结直肠癌细胞HCT116和正常人结肠上皮细胞CCD 841 CoN细胞。通过免疫荧光检测IL-6和NF-κB信号轴。通过Western blot检测p-STAT3、p-JAK2和miR-146-b蛋白表达水平。通过Transwell分析法检测细胞迁移能力，通过TUNEL染色检测细胞凋亡。通过CCK-8评估不同处理组细胞活力。通过Western blot检测EMT间充质标志物波形蛋白(Vimentin，VIM)，SNAIL和ZEB1及上皮标志物E-钙粘蛋白(CDH1)水平。通过PCR检测CRC标志物CD44、CD133、NANOG和Lgr5mRNA的表达。结果：与对照组相比，CRC组IL-6和NF-κB表达水平均升高(P<0.05)，而IL-6抑制剂组较CRC组IL-6和NF-κB表达水平均降低(P<0.05)。与对照组相比，CRC组p-STAT3、p-JAK2和miR-146-b蛋白含量均升高(P<0.05)，而IL-6抑制剂组较CRC组p-STAT3、p-JAK2和miR-146-b蛋白含量均降低(P<0.05)。与对照组相比，CRC组细胞迁移能力增加，细胞凋亡降低(P<0.05)，而IL-6抑制剂组较CRC组细胞迁移能力降低，细胞凋亡增加(P<0.05)。与对照组相比，CRC组0 h细胞活力无差异(P>0.05)，24、48和72 h细胞活力均增加(P<0.05)，而IL-6抑制剂组较CRC组0 h细胞活力无差异(P>0.05)，24、48和72 h细胞活力均降低(P<0.05)。与对照组相比，CRC组VIM、SNAIL和ZEB1蛋白含量均升高，CDH1蛋白含量降低(P<0.05)，而IL-6抑制剂组较CRC组VIM、SNAIL和ZEB1蛋白含量均降低，CDH1蛋白含量升高(P<0.05)。与对照组相比，CRC组CD44、CD133、NANOG和Lgr5 mRNA的表达均升高(P<0.05)，而IL-6抑制剂组较CRC组CD44、CD133、NANOG和Lgr5 mRNA的表达均降低(P<0.05)。结论：STAT3 miR-146-b反馈回路抑制IL-6的NF-κB信号轴调控结直肠癌细胞的干性。IL-6/STAT3/miR-146-b轴可以作为CRC的诊断标记，并为结肠癌治疗提供治疗靶标。

关键词