摘要

目的 探讨健骨颗粒含药血清对UMR-106成骨样细胞内质网应激ERS凋亡的影响和作用机制。方法 选用UMR-106成骨样细胞，采用0、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05μmol/L不同浓度的GSK2606414(PERK抑制剂)对细胞进行干预，采用CCK8法筛选GSK2606414最佳干预浓度。将生长状态较好的UMR-106细胞随机分为阴性对照组(NC组)、模型组(H2O2组)、健骨颗粒组(H2O2+JG组)和阳性对照组(H2O2+GSK2606414组)4组。NC组和H2O2组采用10%生理盐水血清干预12 h,H2O2+JG组采用10%健骨颗粒含药血清干预12 h,H2O2+GSK2606414组采用0.03μmol/L的GSK2606414和10%生理盐水血清干预12 h，除NC组外，其余各组在不更换新培养基的情况下，再分别加入10μmol/L H2O2干预12 h。采用激光共聚焦显微镜观察细胞内NC组和H2O2组GRP78和Caspase-12荧光表达情况，DCFH-DA检测活性氧(ROS)含量，激光共聚焦显微镜观察细胞内钙离子实时动态变化判断ROS/ERS模型是否成立。再采用Annexin V-FITC/PI检测4组细胞晚期凋亡率，qPCR和Western blot检测4组ERS相关标志指标GRP78、PERK、eIf2α、ATF4和CHOP mRNA转录水平和蛋白相对表达量。结果与0μmol/L组比较，0.03μmol/L的GSK2606414是干预UMR-106细胞12 h后对细胞活力没有影响的最大浓度，故使用该浓度作为后续H2O2+GSK2606414组的实验干预条件。与NC组相比，H2O2组ROS含量显著增高(P<0.01),GRP78和Caspase-12的蛋白荧光表达量明显增加，细胞内钙离子流动速度加快并持续增高，表明H2O2诱导UMR-106细胞ROS/ERS模型的成功建立。与NC组相比，H2O2组凋亡率显著增高(P<0.05),GRP78、PERK、eIf2α、ATF4、CHOP mRNA转录水平和蛋白相对表达量均显著增高(P<0.01)。与H2O2组相比，H2O2+JG组和H2O2+GSK2606414组ROS含量显著降低(P<0.01)，凋亡率显著降低(P<0.05),GRP78、PERK、eIf2α、ATF4、CHOP mRNA转录水平(P<0.05)和蛋白相对表达量(P<0.01)均显著降低。结论 健骨颗粒可通过PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路缓解内质网过度应激，降低成骨细胞凋亡率，发挥防治绝经后骨质疏松症的作用。

关键词