摘要

目的:目前,中国是世界上肝癌发病率和死亡率持续上升的国家之一。5-fluorouracil(5-FU)是消化道肿瘤治疗的常用化疗药物,其临床用药表明,随着5-FU剂量的增大其药物毒副作用逐渐增大,5-FU的毒副作用已成为其临床应用的瓶颈问题,因此急需开发新型低毒副作用的肝癌临床治疗药物。中药因其具有多靶点、低毒性、整体调节的作用,越来越受到全世界的关注,因而从中药中寻找降低5-FU用量同时增强5-FU抗肿瘤作用的药物或许是潜在的肝癌治疗手段。解毒消癥饮(JXD)属于临床验方,应用于消化道肿瘤特别是肝癌治疗已10年有余。前期研究发现,JXD通过诱导肿瘤细胞凋亡、阻滞细胞周期及抑制血管新生等方式抑制肿瘤生长。本研究中我们评估了解毒消癥饮乙酸乙酯部位(EE-JXD)联合5-FU的抗肿瘤作用,探讨JXD的生物学作用机制,以期为JXD的临床应用提供更多的实验依据。方法:EE-JXD按照本研究曾发表论文的方法制备,再用DMSO稀释为200 mg/mL的储存液用于细胞实验母液,采用生理盐水进一步配制为6 mg/mL动物实验用药。HepG2细胞用含有10%胎牛血清、1%抗生素的RPMI-1640培养液培养,培养条件为37℃、5%CO2,HepG2正常培养后取对数期细胞种板,采用不同药物浓度的EE-JXD(0.05、0.1、0.2、0.4 mg/mL),5-FU (0.05、0.1、0.2、0.4 mg/mL),EE-JXD+5-FU [(0.05+0.05)、(0.1+0.1)、(0.2+0.2)、(0.4+0.4)mg/mL]干预24 h后,经MTT检测细胞活力。细胞被分为对照组、EE-JXD组(0.1 mg/mL)、5-FU组(0.1 mg/mL)、EE-JXD+5-FU组[(0.1+0.1)mg/mL]共4组,药物干预24 h后,Hochest 33258染色后通过荧光显微镜观察HepG2细胞凋亡的发生情况,AnnexinⅤ-FITC/propidium iodide (PI)标记后流式细胞仪检测细胞早期凋亡和晚期凋亡率。在32只BALB/c(nu/nu)体质量为18～22 g小鼠皮下建立HepG2细胞的移植瘤模型,HepG2细胞密度为5×106/mL被注入右前肢皮下,7 d后小鼠被随机分为4组{对照组(生理盐水),EE-JXD组[15 g/(kg·d),i.g.],5-FU组[10 mg/(kg·d),i.p.],EE-JXD+5-FU组[15 g/(kg·d)+10 mg/(kg·d)]},给药30 d,其间每3天测量肿瘤体积和小鼠体质量,30 d后取材称量肿瘤重量,采用TUNEL法检测肿瘤组织的凋亡率。结果:EE-JXD、5-FU和EE-JXD+5-FU均以剂量依赖的方式抑制肿瘤细胞活力, EE-JXD+5-FU组抑制作用最强,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。Hoechst荧光染色观察表明,EE-JXD和5-FU能够促进HepG2细胞的凋亡。进一步流式细胞术检测早期和晚期凋亡率表明,5-FU组、EE-JXD组和EE-JXD+5-FU组凋亡发生率分别为5%、7.8%和12.9%。体内实验也证实EE-JXD+5-FU能够显著抑制小鼠皮下移植瘤的生长,30 d后对照组肿瘤重量为(0.43±0.06)g,5-FU组为(0.08±0.01)g,5-FU组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),5-FU+EE-JXD组的肿瘤重量为(0.05±0.01)g,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),表明EE-JXD有效增强5-FU的抗肿瘤作用。TUNEL检测肿瘤组织中凋亡发生率表明,5-FU组显著诱导了肝癌细胞凋亡的发生,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),这种诱导凋亡的作用被EE-JXD增强,EE-JXD+5-FU组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。而4组间小鼠的体质量相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EE-JXD体内外增强了5-FU的抗肿瘤作用,且未见明显的毒副作用,其生物学机制有待进一步研究。

关键词