摘要

目的：探讨24-乙酰泽泻醇A(24A)改善小鼠脑缺血再灌注后脑微血管内皮细胞（BMECs）损伤的作用机制。方法：将45只雄性10周龄C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、24A组，每组15只。模型组、24A组采用20 min双侧颈总动脉结扎后再灌注的方法构建小鼠脑缺血再灌注损伤（CI/RI）模型，假手术组小鼠只分离颈总动脉和迷走神经，不结扎。24 A组采用24 A灌胃，剂量为30 mg/（kg·d）；假手术组和模型组则给予等体积的生理盐水进行灌胃，3组均灌胃1次/d，连续干预7 d。分别采用神经功能缺损评分（mNSS）评估小鼠神经功能受损程度；采用新物体识别测试（NORT）和水迷宫（MWM）评价小鼠认知功能；采用免疫荧光法检测内皮细胞CD31表达；采用Western blot法检测脑组织闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白（Occludin）、紧密连接蛋白-5(Claudin-5)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、瞬时受体电位离子通道-2(TRPM2)、磷酸化苏氨酸蛋白激酶（p-AKT）、磷酸化糖原合成酶激酶-3(p-GSK3β)蛋白表达水平。结果：(1)神经功能：与假手术组比较，模型组mNSS在第1、3、5、7天均明显升高（P<0.05）；与模型组比较，24A组第3、7天mNSS明显降低（P<0.05）。(2)认知功能：与假手术组比较，模型组NORT 1、24 h识别指数明显降低（P<0.05）；与模型组比较，24A组NORT 1、24 h识别指数明显升高（P<0.05）。与假手术组比较，模型组干预后第2～4天逃避潜伏期明显延长，穿越目标平台次数明显减少（P<0.05）；与模型组比较，24A组干预后第3、4天逃避潜伏期明显缩短，穿越目标平台次数明显增加（P<0.05）。(3)内皮细胞CD31、ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达：假手术组CD31荧光表达较为密集，呈现红色荧光；与假手术组比较，模型组CD31荧光表达明显降低（P<0.05）；与模型组比较，24A组CD31荧光表达明显升高（P<0.05）。与假手术组比较，模型组ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达量明显下降（P<0.05）；与模型组比较，24A组ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达量明显升高（P<0.05）。(4) pNF-κB、IL-1β、TNF-α、TRPM2、p-Akt、p-GSK3β蛋白表达：与假手术组比较，模型组p-NF-κB、IL-1β、TNF-α、TRPM2表达明显增加，p-Akt、p-GSK3β表达明显降低（P<0.05）；与模型组比较，24A组p-NF-κB、IL-1β、TNF-α、TRPM2蛋白表达水平明显下降，p-Akt、p-GSK3β表达明显增加（P<0.05）。结论：24A可有效改善CI/RI小鼠的神经功能、认知功能，降低炎症反应，改善BMECs损伤，其机制可能与TRPM2/Akt/GSK3β通路的调控有关。

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