摘要

目的:探讨石斛合剂序贯法(DMOC)对糖尿病合并肝纤维化的抗氧化、抗炎及抗肝纤维化作用机制。方法:将40只5周龄健康清洁级雄性Sprague Dawley大鼠按照随机数字表法分为控制组(基本饮食)、控制干预组(基本饮食+DMOC)、模型组(高脂高糖+链脲佐菌素)和模型干预组(高脂高糖+链脲佐菌素+DMOC),每组10只。4组大鼠分别喂食对应饲料并提供逆渗透水饮用,每周称重1次,根据体质量调整喂食量。控制组和控制干预组以基本饲料饮食喂养;模型组和模型干预组以高脂高糖饮食喂养4周后腹腔注射2次链脲佐菌素(依体质量联合体表面积计算用量为25 mg,间隔72 h),4 d后用血糖测定仪筛选出糖尿病造模成功大鼠(空腹血糖≥11.1 mmol/L)。第36周进行肝活检显示模型组和模型干预组有肝纤维化倾向,第36～44周控制干预组和模型干预组选用DMOC中药干预,第44周末4组大鼠取材检测。采用DCFH-DA法检测血液中活性氧簇(ROS)的含量,ELISA法检测血液中TNF-α、IL-6、TGF-β1含量;运用Masson三色染色法观察肝组织纤维化的变化;采用免疫组织化学法观察肝组织Fibronectin、IV-Collagen胶原纤维的变化;采用蛋白免疫印迹法检测肝组织Smad2、Smad3、pSmad2、pSmad3、α-SMA、MMP1、MMP2、MMP9蛋白的表达。结果:①模型干预组ROS、TNF-α、IL-6、TGF-β1含量低于模型组(P<0.01);②肝组织纤维化的变化:肝组织门脉周围区域大量肝细胞坏死,炎性细胞浸润;③肝组织胶原纤维的变化:Fibronectin、IV-Collagen多沿着胶原纤维沉积处分布,胶原纤维分布区域及数量均明显增加;④与模型组比较,模型干预组pSmad2/Smad2、pSmad3/Smad3、α-SMA/β-actin的相对密度降低(P<0.01),MMP1/β-actin、MMP2/β-actin、MMP9/β-actin的相对密度升高(P<0.01)。结论:DMOC可减少糖尿病合并肝纤维化大鼠Fibronectin、IVCollagen胶原纤维的堆积,其机制可能与DMOC抑制糖尿病合并肝纤维化大鼠ROS产生,减少血液TNF-α、IL-6等炎性细胞因子和递质含量有关;DOMC作用于TGFβ1/Smads/α-SMA通路,通过下调Smad2、Smad3、α-SMA蛋白表达,上调MMP1、MMP2、MMP9蛋白表达,促进Fibronectin、IV-Collagen胶原纤维的降解。

关键词