摘要

目的:探讨针刺对端粒酶基因敲除小鼠(Terc-/-小鼠)海马齿状回脑源性神经营养因子-环磷腺苷效应元件结合蛋白（BDNF-CREB）信号通路的影响及其神经保护作用机制,为促进海马神经生长、延缓衰老、改善学习认知能力提供途径和实验依据。方法:通过聚合酶链式反应鉴定表型,选取18只PCR产物长度为转基因350 bp的端粒酶基因敲除小鼠,体质量（20±5）g,采用随机数字表法分为电针组、手针组和空白对照组,每组各6只。选用富有弹性的塑料网对干预小鼠进行固定,使小鼠所受的压力降到最低。针具采用自制的双极连体针,所用材料为2根毫针（0.30 mm×13 mm）,用绝缘胶布缠绕针柄后分别套进橡胶的透明输液管内,将露出的针柄进行弯曲,弯曲后的针柄部分连接韩氏电针仪。电针组运用韩氏电针仪连接双极连体针刺激双侧足三里穴,进针深度约1.5 mm,韩氏电针仪干预参数为连续波,2 Hz,2 mA,操作时以小鼠局部肌肉轻微抖动且无明显挣扎为度。手针组针刺双侧足三里穴,进针深度约1.5 mm,每5 min行1次捻转手法（平补平泻）。空白对照组以双手轻微束缚模拟抓握动作,操作过程中不进行针刺干预,3组均每天固定时间干预1次,时长30 min,连续4 d。进针及留针期间将小鼠以黑布蒙头,以手轻微给予束缚。3组均在第4天干预结束后取材,10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,于左心室以生理盐水灌注后取出脑组织浸泡于4%多聚甲醛中待用。采用免疫组化检测技术分析端粒酶基因敲除小鼠海马齿状回BDNF、pro-BDNF、CREB蛋白表达水平。结果:第4天干预结束后,电针组BDNF阳性目标平均光密度值较空白对照组和手针组明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）;电针组pro-BDNF阳性目标平均光密度值较手针组明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）;电针组与手针组CREB阳性目标平均光密度值较空白对照组明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:针刺能促进端粒酶基因敲除小鼠海马齿状回BDNF、pro-BDNF和CREB蛋白的表达。

关键词