摘要

目目的的：运动相关肌因子Irisin是以二聚体的形式来发挥功能，故设计串联的Irisin-Irisin模拟二聚体，探讨大肠杆菌表达的重组Irisin-Irisin在活性、对肿瘤细胞功能方面与商品化单体Irisin的异同。方法：选择BL21(DE3)大肠杆菌表达菌株、pET-30a表达载体，通过异丙基-β-D硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导，获得大肠杆菌重组蛋白Irisin-Irisin。用镍柱亲和纯化获取高纯度的重组Irisin-Irisin，将重组Irisin-Irisin和单体Irisin分别处理C2C12骨骼肌细胞，观察线粒体相关基因UCP-1的表达来验证活性，并在胃癌、结直肠癌等消化道肿瘤中验证其功能，对比重组Irisin-Irisin和单体Irisin在活性及对肿瘤细胞功能方面的差异。结果：(1)重组Irisin-Irisin表达、纯化结果：与未诱导的样品比较，IPTG诱导后重组Irisin-Irisin显著表达；通过镍柱亲和纯化法得到大小约27 kDa高纯度的重组Irisin-Irisin。(2)重组Irisin-Irisin活性检测结果：与空白对照组比较，重组Irisin-Irisin组和Irisin组处理C2C12细胞均能上调UCP-1的表达（P<0.05）；相较于Irisin组，重组Irisin-Irisin组诱导UCP-1效果更显著（P<0.05），活性更强。(3)重组Irisin-Irisin抗肿瘤功能检测结果：与空白对照组比较，100 ng/mL Irisin-Irisin组和200 ng/mL Irisin-Irisin组均能抑制胃癌细胞和结直肠癌细胞的迁移能力（P<0.05），但对其增殖、克隆形成能力无影响；相较于Irisin组，重组Irisin-Irisin组抑制细胞迁移的效果更显著（P<0.05）。结论：大肠杆菌原核系统表达的重组Irisin-Irisin有活性，且活性优于单体Irisin；重组Irisin-Irisin对胃癌细胞、结直肠癌细胞迁移有影响，且效果优于单体Irisin。

关键词