摘要

通过观察鹿茸多肽对白细胞介素-1β体外诱导软骨细胞凋亡的影响,以优化软骨组织工程的种子细胞。取新西兰大白兔关节软骨,用0．25％胰蛋白酶和0．2％Ⅱ型胶原酶消化后获得兔软骨细胞,并于体外培养。将第3代软骨细胞随机分成A姐(空白对照组),B组(IL-1β组),C组(鹿茸多肽组),D组(TGF-β1组)。采用透射电镜观察细胞形态,用Annexin V法检测细胞凋亡率,RT-PCR技术分析Caspase-3 mRNA表达水平,ELISA法检测Caspase-3蛋白酶活性。结果显示B组24 h后细胞核内染色质开始呈块状凝集,分布于核膜下,核膜不规则;48 h后细胞核内染色质凝集加剧;72h后部分细胞内的核碎片凝集成凋亡小体;各时间点C、D 组细胞结构改变相对滞后、且数量较少,而A组细胞结构几乎无明显改变。各时间点B组细胞凋亡率、 Caspase-3 mRNA表达及蛋白酶活性逐渐增高,与A组比较差异有统计学意义(P<0．01);C、D组与B组比较则逐渐下降,且差异有统计学意义(P<0．01)。说明Caspase-3参与细胞凋亡,鹿茸多肽通过减少Caspase-3 mRNA表达,并抑制其蛋白酶活性,来阻止或逆转软骨细胞凋亡。

关键词