摘要

目的 基于正交实验筛选高糖损伤模型的最佳葡萄糖干预浓度、补阳还五汤水提液(BYHWT)保护高糖诱导视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)损伤的最佳浓度及最佳作用时间。方法 CCK8法检测4.5、5、10、15、20、25 mg/mL葡萄糖浓度和0、5、10、15.625、31.25、62.5、125、250 mg/mL BYHWT浓度对HRCECs细胞增殖的影响。采用L9(34)正交实验设计以葡萄糖浓度、BYHWT浓度及孵育时间为影响因素，以OD值为评价指标，优选出高糖损伤模型的最佳葡萄糖干预浓度、BYHWT防护高糖损伤HRCECs的最佳浓度及最佳作用时间。根据正交实验优选出的葡萄糖浓度和BYHWT浓度，将HRCECs细胞分为正常组、模型组(优选葡萄糖浓度)与干预组(优选葡萄糖浓度+优选BYHWT浓度)，培养24、48、72 h，每日换液1次，CCK8法测定3组细胞不同时间的OD值。结果 (1)与4.5 mg/mL组比较，25 mg/mL葡萄糖浓度干预HRCECs细胞24、48、72 h后OD值均明显降低(P<0.05)，提示该浓度可引起细胞损伤。与0 mg/mL组比较，5 mg/mL BYHWT干预24 h,10、15.625 mg/mL BYHWT干预48、72 h后OD值均明显提高(P<0.05)，提示该浓度可促进增殖。(2)筛选正交实验可知，影响细胞增殖活性的主次因素为孵育时间>葡萄糖浓度>BYHWT浓度，选择25 mg/mL葡萄糖浓度建立高糖损伤模型，选择5 mg/mL BYHWT浓度干预细胞，观察细胞增殖活性，筛选干预时间。(3)与正常组比较，模型组干预24、48、72 h后OD值明显降低(P<0.05)；干预组干预24、48 h后OD值明显升高(P<0.05)，干预72 h后明显降低(P<0.05)。与模型组比较，干预组干预24、48、72 h后OD值明显升高(P<0.05)。结论 25 mg/mL葡萄糖培养的HRCECs细胞可以作为高糖损伤模型，5 mg/mL BYHWT干预24 h可以用于研究其对高糖诱导HRCECs损伤的保护作用。

关键词