摘要

目的 通过体外实验研究白藜芦醇（RES）抑制小鼠乳腺癌4T1细胞增殖的作用机制。方法 将处于对数生长期小鼠乳腺癌4T1细胞消化后接种于3.5 cm细胞皿中，分别加入0、2.5、5、10、20μmol/L的RES干预72 h，使用倒置显微镜拍照观察法和台盼蓝计数法检测RES干预后细胞密度和活细胞浓度；Western blot检测低密度脂蛋白相关受体结合蛋白5(LRP5)、低密度脂蛋白相关受体结合蛋白6(LRP6)蛋白表达量。再将细胞分为对照组、RES组，分别加入0μmol/L和前述所筛选的最佳干预浓度的RES干预72 h,Western blot检测β-连环蛋白（β-catenin）核蛋白表达量。接着将细胞分为siCtr组、siLRP5组、siLRP6组、siβ-catenin组，siCtr组给予正常培养，siLRP5组加入LRP5小干扰RNA(siRNA)沉默LRP5基因，siLRP6组加入LRP6 siRNA沉默LRP6基因，siβ-catenin组加入β-catenin siRNA沉默β-catenin基因，使用倒置显微镜拍照和台盼蓝计数检测上述4组细胞密度和活细胞浓度；Western blot检测LRP5、LRP6和β-catenin蛋白表达量。最后将细胞分为Vector组、Vector+RES组、LRP5组、LRP5+RES组、LRP6组、LRP6+RES组、N端缺失的β-catenin突变体组（β-cateninΔN组）、β-cateninΔN+RES组，Vector组给予正常培养，Vector+RES组加入前述所筛选的最佳干预浓度的RES干预，LRP5组加入过表达LRP5质粒，LRP5+RES组加入过表达LRP5质粒联合RES最佳干预浓度，LRP6组加入过表达LRP6质粒，LRP6+RES组加入过表达LRP6质粒联合RES最佳干预浓度干预，β-cateninΔN组加入过表达β-cateninΔN质粒，β-cateninΔN+RES组加入过表达β-cateninΔN质粒联合10μmol/L的RES干预。使用倒置显微镜拍照和台盼蓝计数检测上述8组细胞密度和活细胞浓度；Western blot检测LRP5、LRP6和β-catenin蛋白表达量。结果与0μmol/L RES组比较，10、20μmol/L RES组细胞密度和活细胞浓度均降低（P<0.05），对LRP5、LRP6蛋白表达下调显著（P<0.05），故后续选用10μmol/L浓度的RES进行干预。与对照组比较，RES组β-catenin核蛋白表达量下调（P<0.05）；与siCtr组比较，siLRP5组、siLRP6组和siβ-catenin组细胞密度和活细胞浓度降低（P<0.05）；与Vector组比较，Vector+RES组细胞密度和活细胞浓度降低（P<0.05）；与Vector+RES组比较，LRP5+RES组、LRP6+RES组和β-cateninΔN+RES组细胞密度和活细胞浓度升高（P<0.05）。结论 白藜芦醇可阻止小鼠乳腺癌4T1细胞增殖，其机制与通过下调LRP5、LRP6表达抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

关键词