摘要

目的探讨应用日本脑炎病毒(JEV)复制子pCMW-2M构建炭疽JEV复制子DNA疫苗候选株的可能性。方法实验起止时间:2009年1—5月。将炭疽保护性抗原(PA)基因插入复制子pCMW-2M,构建重组质粒pCMW-2MPA。选取6～8周龄的SPF级雌性BALB/c小鼠18只,将其随机分为pCMW-2MPA组(6只,注射pCMW-2MPA)、pCMW-2M组(6只,注射pCMW-2M)、PBS组(6只,注射PBS),进行pCMW-2MPA免疫小鼠实验。观察重组Trx-PA在大肠杆菌中的表达和纯化情况,检测pCMW-2MPA在BHK-21细胞中的表达情况,测定各组小鼠第1、2、3次免疫血清抗PA抗体滴度,检测各组小鼠T细胞刺激指数。结果用SalⅠ和Bsp EⅠ酶切鉴定重组质粒pCMW-2MPA,出现2 025bp和12 500bp两个条带。重组Trx-PA分子量约30KD,与预期一致,其中500 mmol/L咪唑洗脱组分目的蛋白含量较高、杂蛋白几乎没有,重组Trx-PA水平约为300ng/ml。pCMW-2MPA在约30%的BHK-21细胞中呈阳性表达,呈现绿色荧光。pCMW-2MPA组、pCMW-2M组、PBS组随着免疫次数的增多,血清抗PA抗体滴度逐步增高(P<0.05)。pCMW-2MPA组、pCMW-2M组、PBS组第1次免疫、第2次免疫、第3次免疫血清抗PA抗体滴度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。pCMW-2MPA组、pCMW-2M组、PBS组T细胞刺激指数比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的炭疽JEV复制子pCMW-2MPA以DNA形式免疫小鼠后能够产生特异性体液免疫反应和细胞免疫反应,可作为炭疽JEV复制子DNA疫苗候选株。

关键词